分析粗多糖含量測定中選擇葡聚糖標準品的原因

苯酚-硫酸法是用得較多的方法，苯酚-硫酸試劑可與游離的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起顯色反應，己糖在490 nm處有zui大吸收值，吸收值與糖含量呈線性關系。此法是先用標準糖制作標準曲線后，再通過多糖的顯色反應測定吸光度，然后根據其在曲線上的位置推算出多糖的濃度從而推算其含量。此法操作簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅需制作一條標準曲線。蒽酮-硫酸法是另一種常用的方法，其原理是利用糖類遇濃硫酸脫水后生成糖醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合，反應后溶液呈藍綠色，于620 nm處有zui大吸收，顯色深度與多糖的含量呈線性關系。

目前，在制作標準曲線的標準品的選用上普遍存在爭議。葡萄糖因為其低廉的價格和方便的來源，一直是研究人員的。但當我們深究比色法的原理，發現其本身不能區分單糖和寡糖，所以它的測定結果很大程度上依賴于標準品的選擇。此外，比色法通常用濃硫酸短時間水解粗多糖，對于分子量較小的粗多糖，高濃度的硫酸可以在較短時間內將其水解成寡糖和單糖，但當粗多糖的分子量較大時，水解是很難控制的。比如對香菇粗多糖（分子量500,000——1,000,000）的*水解就需要4M HCl或2M H2SO4于100℃作用3-6小時。因此如果用葡萄糖做標準曲線，勢必對粗多糖樣品中大分子部分的測量帶來很大的誤差。對于比色法測定當標準品與被測樣品的結構類似時，得到的結果要準確得多，用葡萄糖做標準品和用葡聚糖做標準品測粗多糖含量時，前者測的結果不同程度的偏高。這樣看來，用葡萄糖作為測定多糖含量的標準品是不合適的。

認識到這一事實，人們開始逐漸改用葡聚糖標準品作為測定粗多糖含量的標準品，使用的是分子量為500,000的葡聚糖。